平台介绍

一、PCR-ARMS

ARMS (amplification refractory mutation system): 通过设计与突变DNA 互补引物,唯有与突变DNA 完互补的引物才可延伸并得到PCR 扩增产物。

技术特点:

● 灵敏度高(灵敏度达0.1% ,是传统测序方法200 倍)

● 操作简单(荧光定量PCR,1.5-2h)

● 可重复性强

二、Sanger 测序

即双脱氧链终止法(Chain Termination Method),是DNA 序列分析的经典方法,可直接读取DNA 的序列,因而可检测已知和未知突变,因此被认为是基因分型的金标准。微卫星不稳定(MSI)及染色体1p19q 缺失检测也可采用该技术。

 技术特点:

PCR 产物经克隆后测序或直接对PCR 产物进行测序

● 基因检测的金标准

● 灵敏性:20%

三、荧光定量PCRReal-Time PCR

可以实现对RNA 的绝?#38498;?#30456;对定量分析,是RNA 分析中较强大、敏感的定量分析技术。常用于单个或多个基因的表达分析及拷贝数变化检测,适用于扩增基因中短的(小于300bp)外显子片段。

技术特点:

● 准确

● 可重复性好

● 操作简单

四、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH

是一种重要的非放射性原位杂交技术。基本原理是: 如果被检测的染色体或DNA 维切片上的靶DNA 与所用的核酸探针是同源互补的,二者经变性- 退火- 复性,即可形成靶DNA 与核酸探针的杂交体。可用于对DNA/RNA 进行定性、定量或相对定位分析。

技术特点:

● 高度的敏感性和可靠性

● 安全、快速

● 能同时显示多种颜色

五、循?#20998;?#30244;细胞(Circulationg Tumor Cell, CTC)检测(CellSearchTM 系统)

结合免疫磁珠、流式分析和免疫发光技术而建立的快速、灵敏的CTC(上皮来源)富集和定量检测技术。也是目前唯一通过FDA CFDA 批准的可用于多种癌症预后判断的

CTC 检测技术。

技术特点:

● 标准化,快速、灵敏

● 半自动,减少人为操作误差

● 重复性好

六、新一代测序(Next Generation Sequencing, NGS

大规模平行测序技术,一次对几十万到几百万条DNA 分子进行序列测定,以能一次并行对几十万到几百万DNA 分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。主要平台包括Illumina 公司 Hiseq/Miseq 系统及Life Technologies 公司Ion PGM/Proton 系统。

技术特点:

● 开放性技术,可检测所有已知和未知的基因变异

● 高通量,一次检测获得大量数据

● 可进行深度测序,灵敏性超高

七、甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR, MS-PCR)

该方法先用重亚硫酸?#26410;?#29702;DNA,随后行引物特异性的PCR。其设计两对引物,分别与重亚硫酸?#26410;?#29702;后的序列互补配对,即一对结合处理后的甲基化DNA 链,另一对结合处理后的非甲基化DNA ?#30784;?#26816;测MS-PCR 扩增产物,如果用针对处理后甲基化DNA 链的引物能扩增出片段,则?#24471;?#35813;被检测的位点存在甲基化?#29615;?#20043;亦然。

该方法灵敏度高,目前应用广泛。

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